Главная


forex бесплатно
монталь отзывы
House Of Sillage Nouez Moi
куплю готовый диплом эксплуатация сэу.

Реакция агглютинации лейкоцитов. Методика

Материалы и оборудование. Для работы необходимы: 5% ЭДТА, декстран 60 г/л (6,0% Infucoll), 0,1% толуидиновый синий в 0,15 М NaCl; 6% уксусная кислота, вазелиновое масло, микрошприцы и микродозаторы, микрокамера (см. раздел «Комплементзависимая цитотоксичность»).

Выделение леикоцитов из крови, обработанной ЭДТА

Смешивают в центрифужной пробирке 9 мл крови и 1 мл 5% ЭДТА, дают постоять 30 минут, центрифугируют 12 минут при 80 g. Обогащенную тромбоцитами надосадочную фракцию отбирают и центрифугируют 15 мин при 500 g. Осадок тромбоцитов отбрасывают. Бестромбоцитную плазму смешивают с осадком эритроцитов. Добавляют 0,5—1 мл 6% инфуколла, разделяют смесь на порции по 2 мл и ставят на 30 минут в термостат (37°С). Эритроциты осаждаются декстраном. Обогащенную гранулоцитами надосадочную фракцию осторожно собирают и центрифугируют 5 мин при 30 g. Готовят суспензию с концентрацией 3—5х109 клеток/л.

Реакция агглютинации лейкоцитов (РАЛ), микрометод

В микрокамеру вносят при помощи микрошприца 2 мкл инактивированной при 56°С сыворотки и 1 мкл суспензии лейкоцитов. Толщина слоя вазелинового масла в камере составляет около 2 мм. Если используется микрокамера Терасаки, в нее вносят 3 мл вазелинового масла. Инкубируют 60 минут при 37 °С. Затем осторожно встряхивают камеру в течение 3 минут. Окрашивают смесь добавлением 1 мкл 0,1% толуидинового синего в 0,15 М NaCl. Через 5 минут лейкоциты становятся ясно различимыми. Проводят микроскопию с 60—100-кратным увеличением. Если имеется существенная контаминация эритроцитами, их гемолизируют добавлением 1 мкл 6% уксусной кислоты.