Главная


Montale chocolate читать далее.

Кожные реакции замедленного типа. Методика

Контактная сенсибилизация мышей

Материалы и оборудование. Для работы нужно иметь пикрилхлорид или оксазолон (2-фенил — 4-этоксиметиленоксазолон), оливковое масло очищенное (можно арахисовое, подсолнечное), полный адъювант Фрейнда, щипцы для маркировки ушей, мышей (самки).

Ход исследования. Схема опыта: через 6—8 дней после контакта с антигеном (иммунизация) повторный контакт с тем же АГ приводит к развитию местной воспалительной реакции. В качестве места контакта выбирают ухо, реакция приводит к его утолщению. Рекомендуется использовать для постановки реакции одно и то же ухо (например, правое), а для нумерации соответственно — левое. Схема (см. таблицу ниже) зависит от силы используемого АГ и от того уровня реактивности, который намечается достичь.

Схема индукции контактной сенсибилизации

Схема индукции контактной сенсибилизации

Схема I применяется при работе со слабыми антигенами или при необходимости получать длительно сохраняющуюся реактивность. Схема II или III применяется при работе с сильными АГ, например в терапевтических целях или при скрининге.

Группы животных: выраженность реакции в значительной мере зависит от штамма (величина набухания, разброс данных), поэтому в предварительных опытах подбирают оптимальный штамм. Желательно использовать самок, поскольку самцы часто имеют следы укусов. Ввиду необходимости тщательного контроля перекрестной реактивности животных метят не красителем как обычно, а прн помощи ушной бирки. Условия подбора представлены в таблице.

Распределение животных по группам для контактной сенсибилизации

Распределение животных по группам для контактной сенсибилизации

Необходимо взвешивать животных всех групп до начала и по окончании опыта, это поможет выявить общетоксический эффект исследуемых препаратов.

Иммунизация и вызывание реакции: готовят 2—3% раствор пикрилхлорида в очищенном оливковом масле; 3% раствор оксазолона — на чистом спирте, иногда вместо спирта используют масло.

При иммунизации по схеме I 0,2 мкмоля вещества суспендируют в 0,15 мл адъюванта (доза на 1 мышь). Инъекцию делают в основание хвоста. Для накожной аппликации 0,1 мл смеси наносят на спину животного и втирают стеклянной палочкой на площади 2—3 см2. Депиляция требуется не всегда, но если в ней возникает необходимость, то волосы выщипывают за один день до опыта (химическую депиляцию не производят). Реакцию вызывают, смазывая намеченное ухо с двух сторон тем раствором, который использовали для иммунизации.

При работе с контактными аллергенами следует всегда надевать резиновые перчатки.

Измерение: толщину уха измеряют при помощи любого подходящего устройства типа штангенциркуля, избегая сдавливания тканей уха. Измерение проводят, как правило, через 24 часа, в некоторых специальных случаях через 48 часов.

Некоторые авторы рекомендуют электромеханическое определение толщины. Описаны способы определения гиперчувствительности замедленного типа при помощи альбумина, меченного 131[1]. Оценка результатов: если при определении толщины уха используют измерительный циркуль для покровных стекол, то толщину можно выражать в относительных величинах или в абсолютных (в мм после соответствующей калибровки). Сравнение средних значений опыта с данными позитивного контроля проводят методами вариационного анализа.

Влияние депиляции на контактную сенсибилизацию мышей

Влияние депиляции иа контактную сенсибилизацию мышей

Кожные реакции замедленного типа у мышей или крыс

Материалы и оборудование. Для работы нужно иметь очищенный антиген, полный адъювант Фрейда, измерительный циркуль, мышей или крыс.

Этапы исследования. Иммунизация и вызывание реакции. Иммунизацию проводят очищенным АГ (например, эритроциты барана, белковые препараты, аллогенная суспензия клеток), вводя его в подошву задней лапы. Обычно вводят 0,01—0,04 мл очень тонкой иглой, продвигая ее как можно дальше. При необходимости сенсибилизацию повторяют через 7 дней. Реакцию вызывают, вводя тот же самый АГ через 9—10 дней под кожу задней лапы, которую не использовали в эксперименте.

Измерение и оценка результатов: в результате реакции происходит опухание той задней лапы, на которой вызывали реакцию. Степень опухания оценивают по изменению толщины лапы или ее объема.

Измерительное устройство для определения объема органов

Измерительное устройство для определения объема органов

В обоих случаях требуется выдерживать одинаковые условия измерения. Ошибку можно уменьшить, измеряя средние величины отпечатков лапы, окрашенной тушью. Измерение проводят через 24 ч и по возможности второй раз через 48 ч после вызывания реакции. Сравнивают толщину (объем) обработанной и необработанной задней лапы одного и того же животного. Данные соотносят с результатами позитивного контроля с адъювантом Фрейнда (ПАФ).

Кожная реакция замедленного типа у морских свинок

Материалы и оборудование. Используют самок морских свинок весом 300—400 г. Нужно иметь антигены, ПАФ, туберкулиновые шприцы, электрическую машинку для стрижки шерсти, измерительный циркуль.

Этапы исследования. Обычно иммунизируют животных эмульсией соответствующего АГ в полный адъювант Фрейнда АГ вводят подкожно в количестве 0,1—0,2 мл во все 4 подушечки конечностей или внутримышечно. Количества АГ может варьировать в зависимости от его природы, например, БЦЖ смешивают в количестве Т 1 мг/мл адъюванта. Интервал между иммунизациями также может меняться, для БЦЖ оптимальный интервал составляет 10 дней. Реакцию вызывают внутрикожным введением АГ в водном растворе в область спины. Непосредственно перед инъекцией на соответствующем участке кожи тщательно выстригают волосы. Не следует испытывать различные концентрации антигенов на одном и том же животном, так как малые дозы антигенов способны вызвать десенсибилизацию и искажение результатов других экспериментов.

Оценка результатов исследования. Кожную реакцию замедленного типа оценивают через 24 и (или) 48 часов после разрешающей инъекции. Ниже приводятся критерии оценки результатов реакции.

— Эритема. Определяют величину эритематозной зоны. Если ее диаметр больше б мм, говорят о положительном результате реакции. Интенсивность эритемы также оценивают в баллах (крестах) от 0 (отрицательная) до + + + + (темно-красная). Геморрагический компонент нетипичен, его наличие должно рассматриваться как признак сопутствующей реакции типа феномена Артюса.

— Уплотнение. Измеряют толщину складки кожи, образуемой одним и тем же участком поверхности до и после разрешающей инъекции, или путем сравнения с симметричным участком кожи на противоположной стороне тела.

При сравнении результатов, полученных на различных животных, необходимо следить, чтобы разрешающая инъекция всегда делалась в одно и то же место.