Главная


Ремонт компьютеров в Путилково.
Вентилируемые фасадные системы еще здесь.

Анафилактические реакции. Метод in vivo

Начиная с экспериментов Прауснитца и Кюстнера в 1921 г. методы исследования анафилаксии in vivo находят очень широкое применение. При поиске антианафилактических фармпрепаратов в качестве модели особенно часто служит пассивная кожная анафилаксия (ПКА) крыс (см. рисунок ниже), когда через некоторое время после введения IgE-содержащей сыворотки вводится соответствующий АГ. В реакции активной кожной анафилаксии (АКА) антиген вводят сенсибилизированным животным внутрикожно.

Пассивная кожная анафилаксия у крысы

Пассивная кожная анафилаксия у крысы

Справа вверху — положительный контроль;
добавление хромоглнката натрия 0,1 нг (справа внизу), 0,2 нг (слева внизу), 0,4 мг (слева вверху)

Появление внутривенно введенного красителя в области реакции АГ — АТ (антитело) указывает на повышенную проницаемость капилляров вследствие иммунологически индуцированного высвобождения медиаторов.

Материалы и оборудование

Для опыта необходимы однополые крысы весом 200—250 г, пипетки, шприцы для инъекций, центрифужные пробирки, зонды, эфир, ФСБ, ацетон, 0,5% раствор сульфата натрия, коклюшная вакцина, овальбумин, синий Эванса, центрифуга, качалка, фотометр.

Пассивная и активная кожная анафилаксия

Иммунизация крыс овальбумином. Растворяют 1 мг овальбумина в 0,2 мл ФСБ и вводят внутримышечно; параллельно внутрибрюшинно вводят 2х1010 микробных клеток Bordetella pertussis. Сыворотки для ПКА получают на 14-й день (IgE-содержащие сыворотки против овальбумина; их можно хранить в замороженном состоянии). Определяют титр ПКА в геометрическом ряду разведений. За титр принимают разведение, которое вызывает образование окрашенного пятна 15—20 мм в диаметре. Для постановки АКА также используют крыс на 14-й день после иммунизации.

Постановка ПКА. Под легким эфирным наркозом в 4 точки на животе вводят по 0,1 мл подходящей концентрации антиовальбуминовой сыворотки внутрикожно. Через 48 ч вводят овальбумин с синим Эванса внутривенно или точно в те же участки, куда вводили сыворотку. Испытуемый фармпрепарат вводят перорально, внутривенно или местно. Для выявления антигистаминного действия и для сравнения добавочно внутрикожно вводят гистамин и 5-гидрокситриптамин. Через 30 минут животных забивают, осторожно отсепаровывают кожу живота и определяют размер и интенсивность окраски пятен. LD50 определяют по графику доза — эффект (% торможения по отношению к дозе в логарифмическом масштабе).

Постановка АКА. Внутривенно вводят синий Эванса (0,25 мл 1,6% раствора на 100 г веса). Сразу же делают внутрикожную инъекцию0,5 мкг ввальбумина (АГ) в три точки на животе. Через 20 минут образование контрольных пятен заканчивается и испытуемый фармпрепарат вводят животному в соответствующей дозе и форме. После достижения желаемого эффекта антиген вводят в три точки с другой стороны живота. Еще через 20 мин животных забивают и оценивают результаты реакции. Определяют площадь пятен и сравнивают интенсивность их окраски.
Количественная оценка анафилактических реакций. Методы количественной оценки применимы к ПКА и АКА. Кожу экспериментальных животных отсепаровывают, вырезают пятна ножницами, измельчают их. Кусочки ткани в течение 24 часов при комнатной температуре экстрагируют смесью 14 мл ацетона с 6 мл 0,5% раствора сульфата натрия. Ацетон и раствор соли последовательно добавляют к кусочкам ткани. После центрифугирования измеряют оптическую плотность надосадочной фракции при длине волны 620 нм.