Главная


Бригада выполнит капитальный ремонт 2 комнатной квартиры дешевле остальных мастеров.

Разделение клеток иммунной системы

Разделение клеток при помощи адгезии
Разделение клеток на аффинных колонках
Разделение клеток методом цитолиза
Разделение клеток при помощи розеткообразования
Разделение клеток в градиенте плотности
Разделение при помощи лектинов
Электрофорез, сортировка и разделение клеток на монослое

Разделение клеток иммунной системы представляет собой необходимую предпосылку для исследований функциональной роли отдельных типов клеток, их кооперативного взаимодействия, дифференцировки и т. д. В конце 60-х годов было обнаружено, что малые лимфоциты являются гетерогенной популяцией, состоящей по меньшей мере из двух классов. С этого момента началось бурное развитие методов разделения иммунокомпетентных клеток. Результатом этих исследований стало обнаружение новых субпопуляций лимфоцитов, весьма различных в функциональном отношении. Исследования в этой области продолжаются.

Следует подчеркнуть, что далеко не всегда в специальной литературе правильно используется термин «популяция». Довольно часто клетки относят к разным субпопуляциям только на основании определенных физических параметров фракционирования, не обременяя себя поиском доказательств того, что эти субпопуляции принадлежат к одной и той же разновидности клеток, находящихся на разных стадиях дифференцировки или активации. К числу новых методов, появившихся в последнее время, следует в первую очередь отнести те, которые основаны на использовании лектинов. Мы ограничимся описанием важнейших, относительно простых, в определенной мере рутинных методов работы и не будем касаться таких сложных процессов, как флюоресцентно-активационное разделение клеток, которое можно освоить только, работая под непосредственным наблюдением более опытного экспериментатора.

Схема физических и биохимических свойств клеток иммунной системы

Схема физических и биохимических свойств клеток иммунной системы

Fc—Fc-рецептор; Гис — гистамии; АГ — антиген; Mlg — мембранный иммуноглобулин; С — рецептор комплемента; Эр — эритроцит; ФАСК — флюоресцентно-активационная сортировка клеток.

На рисунке схематически изображены способы разделения клеток, основанные на физических и биохимических принципах. Здесь речь также идет только о наиболее существенных комбинациях. Один и тот же признак может быть выражен в разной степени на клетках одного типа, кроме того, клетки довольно сильно меняются в процессе дифференцировки и выделяемая популяция может оказаться загрязненной.

Понятие «рецептор» означает «место связывания», независимо от типа биологического процесса, в котором он участвует. До настоящего времени остаются неизученными рецепторы эритроцитов. Известно, что лектины, например, реагируют с углеводными компонентами клеточной мембраны, вероятно, эритроциты через углеводные компоненты собственной мембраны вступают во взаимодействие с соответствующими мембранами лимфоцитов. Ввиду того что исследования в области клеточной иммунологии проводятся повсеместно, получаемые иногда противоречивые результаты довольно скоро получают объяснения. Зачастую речь идет о кажущихся противоречиях, которые возникают вследствие двух основных причин.

1. Различия между процессами in vivo и in vitro. Все больше появляется доказательств того, что культура клеток дает очень ограниченное представление о сложных процессах, происходящих в целом организме.

2. Видовое и органное происхождение клеток. Несмотря на общие принципы организации иммунной системы у млекопитающих, даже у близкородственных видов могут наблюдаться поразительные отличия в тонкой организации функций, которые иногда становятся источником ошибочных интерпретаций. В качестве примера можно назвать совершенно различное распределение Θ-антигенов у мыши и крысы или различия в строении Fc-рецепторов Т- и В-лимфоцитов мыши и человека. В качестве причин ошибок при разделении клеточных элементов часто выступают подлинные артефакты. Причины эти следующие:

а) недостаточные знания об адгезионных свойствах и селективной чувствительности отдельных субтипов клеток;

б) незначительный выход определенного типа клеток, который может быть обусловлен непреднамеренным избирательным удалением важного в функциональном отношении субтипа, что приводит в свою очередь к тому, что состав предположительно чистой клеточной субпопуляции не отражает ее реального состава в организме. Например, чистая популяция Т-лимфоцитов, из которой адгезией удалены Т-супрессоры, будет давать более выраженный иммунный ответ, чем существующий in vivo пул Т-клеток;

в) стимуляция или торможение тех или иных клеточных функций может иметь место вследствие разделения клеток, что приводит соответственно к усилению или ослаблению иммунного ответа. Имеются многочисленные примеры артефактов, связанные с розеткообразованием, очисткой на аффинных сорбентах, флюоресцентно-активационным разделением, агглютинацией лектинами и т. д.

Более подробно возможные причины артефактов будут рассмотрены в конце описания каждого метода.