Главная


Бухгалтерский шкаф металлический практик.
Половой акт длительность, продолжительность нормального полового акта orthodox.od.ua.

Разделение клеток при помощи розеткообразования

По принятому в иммунологии определению «розетки» образуются при фиксации эритроцитов на поверхности различных клеток. Этот феномен обусловлен специфическим взаимодействием компонентов мембран обоих типов клеток. У розеткообразующих клеток (лимфоциты, макрофаги и др.) этими компонентами могут быть рецепторы антигенов комплемента, Fc-фрагментов и др., глобулины или случайно дающие перекрестные реакции с мембранами эритроцитов компоненты (спонтанное розеткообразование).

В случае эритроцитов, помимо мембранных компонентов, это могут быть адсорбированные или конъюгированные антитела или антигены (методику розеткообразования). Важнейшие примеры розеткообразования эритроцитами и лимфоцитами различных биологических видов представлены в таблице.

Спонтанное образование розеток

Спонтанное образование розеток

Разделение розеток. Разделение розеток и свободных лимфоцитов проводят центрифугированием в градиенте плотности. Условия центрифугирования могут варьировать (400 g в течение 30 минут; 450 g в течение 45 минут или 860 g в течение 20 минут) в зависимости от целей эксперимента. При успешном разделении розетки осаждаются, а свободные лимфоциты остаются в интерфазе. От эритроцитов освобождаются гемолизом.

Оценка метода

Фракционирование при помощи розеток вследствие его относительной простоты является одним из наиболее часто применяемых методов разделения Т- и В-лимфоцитов наряду с сепарированием на найлоновой вате. Известно большое количество методических вариантов, зачастую малооправданных, что приводит к трудностям интерпретации получаемых результатов. Степень чистоты получаемых клеток в целом удовлетворительная, однако для получения суспензии Т- или В-лимфоцитов с чистотой более 90% приходится повторять дважды, процедуру розеткообразования и отделения ввиду нестабильности некоторых розеток.

Артефакты. При повторном разделении клеток методом розеткообразования происходит обогащение выделяемых клеток субпопуляцией с повышенной аффинностью. К числу недостатков этого метода относится то, что нельзя рассматривать выделенные клетки как нестимулированные. Т-лимфоциты, полученные методом розеткообразования с эритроцитами барана, усиленно реагируют в смешанной культуре лимфоцитов, в реакции бласттрансформации КонА, при стимуляции фактором роста Т-клеток, а также проявляют активность, характерную для К- и NK-клеток. Следует отметить, что активность. К-клеток заметно снижалась или полностью исчезала, когда после выделения розеток ЭБ лизировали хлоридом аммония, а не дистиллированной водой, как обычно. Что касается выделения В- и Т-лимфоцитов путем связывания клеток с Fc-рецепторами комплексов антиген-антитело (ЕА-розетки), то к этому методу применимы те же ограничения, что и при разделении на колонках.