Главная


Стоматология ЮАО
Montale red еще на сайте.

Определение электрофоретической подвижности

Определение относительной электрофоретической подвижности может служить для характеристики неизвестных белков. Абсолютной электрофоретической подвижностью называют действительную длину пробега исследуемого вещества, деленную на напряжение и время (размерность 10-5 см2 В-1 сек-1). Для определения нулевой точки электроэндоосмоса, которая при электрофорезе в агаровом геле не совпадает с точкой старта, используют вещества, электрически нейтральные и обладающие ограниченной диффузией (леван, декстран, цианкобаламин). В случае, если иммуноэлектрофорез протекает в геле агара, путь, пройденный молекулами белка, представляет собой результирующую величину электрокинетического потенциала и электроосмотического потока. Поэтому электрофоретическую подвижность белка получают сложением видимой электрофоретической подвижности и электроосмотической подвижности. Можно вообще не определять нулевой точки электроосмоса для изучаемого белка, если на той же пластине вместе с ним мигрируют по крайней мере два белка с известной электрофоретической подвижностью. В этом случае подвижность исследуемого белка определяется по следующей формуле:

1/img/f26.JPG

где Ux — подвижность исследуемого белка;
Ua и Ub— подвижности известных белков;
АХ — расстояние между белками с известной и неизвестной подвижностью;
АВ — расстояние между белками с известной подвижностью.

Определение электрофоретической мобильности при иммуноэлектрофорезе

Определение электрофоретической мобильности при нммуно-электрофорезе

А — альбумин, Т — трансферрин, G — IgG, R — резервуар с антигеном, IS — канавка для иммунной сыворотки,
АВ — расстояние между вершинами дуг а и Т, АХ — расстояние между вершинами дуг А и G

В качестве референс-белков удобно использовать сывороточный альбумин и сывороточный трансферрин человека. Абсолютная подвижность сывороточного альбумина при рН 8,6 составляет 6,1*10-5 см2 В-1 сек-1, трансферрина — 3,1*10-5 см2 В-1 сек-1,. Относительную электрофоретическую подвижность определяют как подвижность исследуемого белка по сравнению с сывороточным альбумином. Подвижность сывороточного альбумина принимают равной 1,0.