Главная


Питьевой спирт. Как отличить метиловый спирт.

Область, контактирующая с антигеном

С помощью аффинной метки (мечения по сродству) было показано, что гипервариабельные участки очищенных антител представляют собой те части молекулы, аминокислотные остатки которых действительно контактируют с антигеном и определяют таким образом антигенную специфичность антитела. Метка по сродству обычно обнаруживается как в легких, так и в тяжелых цепях, что указывает на участие обоих цепей в связывании антигена. Судя по первичной структуре пептидов, меченных по сродству, они находятся около гипервариабельных участков или входят в их состав, хотя в каждом конкретном случае обычно метились лишь немногие гипервариабельные участки.

Вариабельность в различных положениях последовательностей легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов всех видов

Стрелками показаны места прикрепления аффинных меток, установленные в различных исследованиях.

Полное представление о строении контактирующей области можно получить при анализе трехмерной структуры Fab-фрагмента.

Ход пептидной цепи Fab-фрагмента из миеломного белка МсРС603 мыши показывает, как весь фрагмент делится на плотноупакованные постоянные и вариабельные области, состоящие из пар доменов тяжелых и легких цепей и соединенных протяженными сегментами, которые обозначаются как участки переключения.

Участок соединения с антигеном, расположенный на правом конце фрагмента, построен полностью из прилегающих петлей гипер-вариабельных аминокислот (темные кружки), которые принадлежат обоим полипеп-тидным цепям.

Гипервариабельные участки группируются на одном конце молекулы, что делает их полностью доступными растворителю. Окончательно роль гипервариабельных участков в формировании области антитела, связывающей антиген, была выяснена рентгеноструктурными исследованиями комплекса Fab-фрагмента с низкомолекулярным антигеном.

Модель участка связывания антитела МсРС603 с присоединенным к нему фосфорилхолином.

Хорошо видно, насколько форма этого участка комплементарна таковой гаптена. Боковые цепи аминокислот, ограничивающие полость,
реагируют с гаптеном слабыми нековалент- ными взаимодействиями. Отмеченная на рисунке принадлежность аминокислот той или иной цепи
указывает на то, что в формировании участка связывания участвуют все три гипервариабельные области тяжелой цепи,
определяющие комплементарность, но только одна такая область легкой цепи. У различных антител, как показывают
данные по их трехмерной структуре, вклад в образование участка связывания каждой из шести гипервариабельных областей, определяющих комплементарность, неодинаков.

При изучении мышиного миеломного белка МОРС 315, способного образовывать комплекс с динитрофенильной группой (ДНФ), удалось показать связь между идиотипией, гипервариабельными участками и областью, связывающей антиген. Результаты мечения по сродству этого белка указывали на близость гипервариабельных участков к антигенсвязывающей области. Впоследствии был получен Fv-фрагмент, состоящий из нековалентно связанных V-областей тяжелых и легких цепей и способный реагировать с антигеном. Согласно серологическим данным, в этом фрагменте имеется полный набор идиотипических детерминант, и в то же время в нем не обнаружено каких-либо отрезков константных областей. В этих исследованиях впервые было отчетливо показано, что идиотипы определяются строением лишь вариабельных областей.