Главная


Обучение биоэнергетика посмотреть.
Montale Taif Roses смотрите на сайте.

Клетки, несущие иммуноглобулины двух изотипов

Существование клеток, несущих на поверхности Ig более чем одного изотипа (double bearing cells), было обнаружено во многих лабораториях. В некоторых случаях исследователи смогли продемонстрировать, что эти Ig синтезированы самой клеткой, а не адсорбированы поверхностью клетки из плазмы крови. Существование клеток, экспрессирующих μ и δ, трудно объяснить, если считать, что для экспрессии δ всегда необходим акт рекомбинации, при котором происходит делеция гена μ. На самом деле, как было показано в ряде лабораторий, клетки, несущие гены μ, и δ, могут содержать экспрессирующиеся цепи μ и δ без всяких следов переключения. Маки и др. изучали гибридому GCL2.8, содержащую лишь одну копию хромосомы 12, в которой располагаются мышиные гены СH. Гибридома эта продуцирует как IgM, так и IgD, а соответствующие μ- и δ-мРНК, как было показано, содержат одну и ту же последовательность VH. Данные блоттинга по Саузерну указывали на то, что, хотя область JH подверглась перестройке (рекомбинация V-D-J необходима для любой экспрессии Н-цепи), гены μ и δ остались в гаметной конфигурации без каких-либо следов переключения. Простейшее объяснение этих результатов состоит в следующем: μ-мРНК и δ-мРНК образуются при транскрипции одной и той же области генома, путем альтернативного сплайсинга. Эта схема напоминает модель альтернативного синтеза мембранных и секретируемых форм Н-цепей. В другой гибридоме, секретирующей только цепь δ, была обнаружена делеция гена μ, как это и ожидалось на основании описанных ранее исследований по экспрессии СH в миеломах. Эти и другие аналогичные опыты привели к предположению о том, что клетки, несущие два изотипа, могут представлять собой промежуточный этап между клетками, синтезирующими только μ, и клетками следующей стадии, синтезирующими только новый изотип; сначала новый изотип синтезируется в результате альтернативного сплайсинга мРНК, несущей несколько СH; лишь после этого происходит переключение генов.

Для объяснения экспрессии с переключением изотипа и в других системах были предложены сходные модели с использованием РНК-транскриптов, содержащих множественные гены СH. Так, в линии В-клеток (полученной при трансформации вирусом лейкоза мышей Абельсона) при культивировании in vitro наблюдалось переключение изотипа с и на γ2b, однако при этом оба гена (г оставались в «непереключенной» форме. В другой работе отобранные методом проточной цитофлуорометрии (FASC) спленоциты, несущие на поверхности IgE (большая их часть несла два изотипа IgE и IgM), содержали гены μ, е и у, которые при блоттинге по Саузерну давали полосы, неотличимые от гаметных как по размеру, так и по интенсивности в обеих работах смена изотипа без «переключающей» перестройки объяснялась наличием длинных РНК-транскриптов. Подтверждение такой модели осложняется техническими трудностями исследования этих гипотетических длинных молекул РНК. РНК-транскрипт, кодирующий гены μ и δ, должен иметь длину не менее 12 тпн (расстояние между сегментом JH и геном δ), а соответствующие транскрипты, необходимые для кодирования γ2b или ε, как в приведенном выше примере, должны быть длиной соответственно 130 и 150 тпн! Транскрипты такого размера должны встречаться крайне редко, если это вообще возможно. Модель постулирует также наличие механизма сплайсинга РНК, способного избирательно соединять предназначенный для экспрессии ген СH с перестроенным сегментом JH (VDJ), вырезая при этом все промежуточные гены СH. Одна из модификаций модели допускает одновременное осуществление транскрипции и сплайсинга таким образом, что промежуточные этапы сплайсинга могут происходить по мере прохождения РНК-полимеразой локуса СH еще до того, как будут транскрибированы гены, наиболее удаленные в сторону З'-конца. При таком механизме нет необходимости постулировать образование сверхдлинных молекул РНК. Еще одна, но чисто спекулятивная гипотеза состоит в том, что транскрипция может начинаться непосредственно с 5'-конца гена е независимо от транскрипции VDJ. Полученные последовательности гена е и VDY могут затем соединяться на уровне РНК. Насколько правомерны эти гипотезы, покажут дальнейшие исследования.