Главная


казино АзартПлей

Исследования in vivo

В конце 60-х — начале 70-х гг. в большинстве работ, посвященных функционированию макрофагов, использовалась модель иммуногенности макрофагов in vivo. Макрофаги инкубировали с радиоактивно меченным антигеном (например, с 131I-гемоцианином) и через разное время после инкубации вводили сингенным реципиентам, исследуя их способность индуцировать синтез антител. Часть макрофагов инкубировали in vitro, и через разное время определяли количество 131I-меченого антигена, остающегося в клетках или выделяемого в среду. Антигены вначале связывались с клеточной поверхностью, а затем поглощались в составе мембранных пузырьков и быстро подвергались катаболизму. Около 80% антигена, первоначально связавшегося с клеткой, деградировало; большая часть катаболизированного антигена позднее обнаруживалась в культуральной среде в виде 131I-аминокислот.

Судьба 131I-гемоцианина после поглощения макрофагами

Время Гемоцианин, связанный с клетками Гемоцианин в культуральной среде
общее содержание
метки, %
содержание метки в ТХУ-нерастворимой фракции, % общее содержание
метки, %
содержание метки в ТХУ-нерастворимой фракции, %
0
2
4
21
100
20—30
9—14
9—14
60—70
50
60—75
60—75
0
70—80
86—91
86—91
-
14—20
10—14
10—14

В то же время оставшиеся 20% связанного клетками антигена избегали первоначальной деградации и оставались ассоциированными с клетками.

Связанный с клетками пул можно было разделить на три фракции:

Судьба антигена в макрофагах

Время (часы) Содержание метки, %
в культуральной среде в клетках на мембране
24
48
72
94/13
96/11
97/12
4,1
2,9
2,1
1,8
0,7
0,6

От 3 до 7% исходно связавшегося с клетками белка выделялись макрофагамив среду. Появление этих продуктов не было связано с отщеплением гемоцианина, ассоциированного с клеточной поверхностью, поскольку их образование не подавлялось обработкой поверхности макрофагов трипсином. В то же время эти продукты были гетерогенны по размеру, что указывает на вызванные макрофагами изменения в строении молекулы. Большая часть выделяемого материала сохраняла способность реагировать с антителами. Секреция антигена происходила преимущественно в первые два часа после его поглощения. Из макрофагов также медленно выделялось небольшое количество антигена, столь же иммуногенного, как и нативная молекула. Возможно, эта часть секретируемого антигена возникала из внутриклеточного пула в результате экзоцитоза фагосом, возвращавшихся к клеточной поверхности. Второй пул антигена находился внутри клеток и медленно распадался. Между количеством распавшегося антигена и его иммуногенностью не было обнаружено корреляции. В случае с гемоцианином иммуногенность связанного с макрофагами антигена была относительно стабильной в течение нескольких дней, в то время как большая часть антигена катаболизировалась. Третья часть связанного с клетками антигена располагалась на клеточной поверхности и представляла собой небольшое число молекул, оставшихся связанными с мембраной после поглощения большей части антигена. Примерно 1 % исходно связанного с клетками белка сохранялся на поверхности клеток, но затем постепенно терялся. Хотя роль этих поверхностно-связанных компонентов не известна, показано, что инкубация макро-фагов с антителами к антигену или с трипсином перед введением клеток животному заметно снижала их иммуногенность.

Действие антител к антигену и трипсина на инкубированные с антигеном макрофаги

Обработка Образование антител в ответ на
САЧ KLH
обработанные необработанные обработанные необработанные
Трипсин 0,0 18,6 2,4 9,4
Антитела не определялось 1,8 11,3

Этот результат позволил Унэнью и Цероттини постулировать, что иммуногенная детерминанта вовсе не является процессированным фрагментом и что мембрана макрофагов служит тем местом, где некоторые молекулы антигена избегают деградации и сохраняют свою исходную структуру.